培养条件：气相条件为95%空气与5%二氧化碳，培养温度设定为37℃。人黑色素瘤细胞A875是一种来源于人类皮肤癌的细胞系，广泛应用于肿瘤生物学研究、药物筛选及癌症机制的探索。该细胞系经过STR（短串联重复序列）鉴定，确保了其遗传特征的稳定性与细胞株的真实性。

传代方法：首次传代建议按1:2的比例进行。为了达到最佳培养效果，建议在购买细胞的同时购买细胞培养基，并享受优惠价格。收货后，请勿立即开启瓶盖。请及时核对培养瓶上的细胞名称是否与您订购的名称一致，以及观察瓶身是否有损坏或漏液等异常情况。如果没有发现问题，请使用显微镜观察细胞的生长状况，并拍摄不同倍数的照片（建议分别为40x、100x和200x），前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片将默认细胞状态良好。

贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。当大部分细胞变圆并脱落时，迅速轻敲培养瓶并加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落并吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（即分别转入两个T25瓶），补充新鲜的完全培养基至每瓶5-8ml，最后置入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞的传代步骤包括：

1. 进行半换液法处理，将培养瓶竖立于培养箱中静置约1小时，吸掉约3ml培养基后，补充3ml的完全培养基。如培养基变色较慢，可直接添加约500ul FBS，并在传代时直接补充5ml培养基，分至两个培养瓶中。通常这种方法传代3次后可使用离心法去除死细胞。
2. 如需分瓶，可将细胞悬液收集至离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养基重悬混匀后按1:2比例分至新T25瓶中，添加6-8ml新配置的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续按1:2～1:5的比例进行传代。

细胞冻存及复苏需遵循以下步骤：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观测细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基以终止消化，随后轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，将沉淀细胞与1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001）混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃保存24小时以上再转入液氮罐。

细胞复苏步骤为：

1. 从液氮中取出细胞冻存管，快速置于37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶后，用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶，放于37℃、5%CO2的细胞培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

注意事项：在运输过程中，一些细胞因贴壁不牢而发生脱落属于正常现象。如脱离较多，请将培养液收集至离心管中，以1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养，随后加入胰酶进行消化，最终按1:2进行分瓶传代并补充完全培养基。

我们还提供细胞问题的处理标准：

• 若在运输过程中出现细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等情况，我们将提供重发服务。
• 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后重发。
• 常温与干冰运输的细胞复苏后情况如不良，也可重发，具体需提供细胞状态照片。
• 细胞活性问题需在收到产品7天内提出，经过活力检测及核实后予以重发。

在处理细胞问题时，特定情形如客户故意造成污染或不当操作导致细胞状态不佳等情况将不提供重发服务。相对的，若您在我们提供的服务中遇到任何问题，918博天堂始终欢迎您与我们联系以获取支持与帮助。